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Ultimate Precision Probes

 

 

qPCR-Sonden mit einem intern platzierten Quencher für verbesserte Quenching-Eigenschaften


Entdecken Sie die perfekte Lösung für Ihre qPCR-Assays mit unseren Ultimate Precision Probes.

 

Angebot anfordern

 

Die Entwicklung diagnostischer qPCR-Assays bringt viele Herausforderungen mit sich:

 

  • Der qPCR-Assay ist aufgrund hoher Hintergrundsignale nicht empfindlich genug.
  • Die Leistung einzelner Assays in multiplexen Anwendungen ist unzureichend.
  • Der qPCR-Assay ist nicht robust genug für alle verschiedenen Probentypen, die Sie analysieren möchten.
  • Eine aufwendige Assay-Optimierung kostet wertvolle Zeit und Ressourcen.
 

Wir freuen uns, Ihnen die optimierten Ultimate Precision Sonden vorzustellen – die Lösung für diese Herausforderungen!

 

 

 

Ultimate Precision Sonden bieten eine äußerst zuverlässige, präzise und robuste qPCR-Assay-Performance durch folgende Merkmale:

 

DESIGN: Ultimate Precision Probes verfügen über 9 Basen zwischen Fluoreszenzfarbstoff und Quencher, im Vergleich zu 20 Basen in herkömmlichen Sonden. Dies führt zu einer hohen Quenching-Effizienz und damit zu geringem Hintergrundrauschen sowie einer hervorragenden Performance während der PCR-Zyklen.

REINHEIT: Dank unserer patentierten hochauflösenden HPLC-Reinigung weisen die Sonden eine außergewöhnliche Reinheit auf, was sich positiv auf die Linearität und Effizienz von qPCR-Assays auswirkt.

STABILITÄT: Ein Phosphat am 3’-Ende der Sonde sorgt für eine robuste Stabilität über den gesamten Lebenszyklus – während der Lagerung, Pipettierung und des qPCR-Laufs. Dadurch werden zuverlässige Ergebnisse selbst für hochempfindliche Assays mit sehr niedriger Nachweisgrenze und einer hohen Anzahl an Zyklen gewährleistet.

 

 

Produkt Details & Spezifikationen

 

 

IP-freundliches Fluorophor & Quencher Portfolio

 

Ultimate Precision Probes decken das gesamte sichtbare Spektrum von blauen bis roten Wellenlängen ab und bieten so maximale Flexibilität im Assay-Design. Gleichzeitig sind alle hier vorgestellten Farbstoffe und Quencher unter IP-freundlichen Bedingungen für den kommerziellen Einsatz in Diagnostik-Kits verfügbar.


Wir freuen uns auf eine detaillierte Beratung, um ein Pilotprojekt individuell nach Ihren Anforderungen zu planen. Kontaktieren Sie uns!

 

 

Die Quenching-Effizienz steigt, je näher Fluorophor und Quencher beieinander liegen und je besser die Emissionswellenlänge des Fluorophors mit dem Absorptionsmaximum (Amax) des Quenchers übereinstimmt.Der Quenching-Bereich kann je nach individueller Oligo-Sequenz und Kombination aus Quencher und Fluorophor variieren, da weitere physikalische Effekte wie Kontakt-Quenching eine Rolle spielen.Alle Wellenlängen sind in nm angegeben.

 

 

Spezifikationen & Optionen

Das können Sie von unseren Ultimate Precision Probes erwarten.

 

  • Intern gequenchte Sonde mit BHQ1 oder BHQ2 zwischen der 9. und 10. Base
  • Große Auswahl an 5'-Farbstoffen – siehe Farbstoff-/Quencher-Kombinationen für Details
  • 3'-Phosphat-Modifikation für maximale Sondenstabilität
  • Interne Modifikationen verfügbar: 2’-Desoxyinosin [I], 2’-Desoxyuridin [U], 5’-Methyl-dC [5MedC]
  • Locked Nucleic Acid (LNA)-Basen zur Optimierung der Schmelztemperatur
  • DNA-Sequenzlängen von 10 bis 40 Basen
  • Höchste Reinheit durch neu entwickelte hochauflösende HPLC-Reinigung
  • Qualitätskontrolle mittels MALDI-TOF-Massenspektrometrie
  • Lieferung als lyophilisierte Sonde oder in definierter Konzentration
  • Wahl des Lösungsmittels: Wasser oder TE-Puffer (10 mM Tris, 1 mM EDTA; pH=8)
  • Maximale Flexibilität bei der Menge – einfach den gewünschten Ertrag in pmol oder nmol angeben
  • Schnelle Lieferzeiten von 8 - 10 Arbeitstagen

 

Optionale Dienstleistungen:

  • Individuelle Normalisierung oder Aliquotierung
  • Individuelle Lösungsmittel
  • Individuelle Röhrchen
  • Analyse-Zertifikat

 

qPCR Analysedaten

 

In qPCR-Experimenten zeigen Ultimate Precision Probes im Vergleich zu standardmäßigen dual-markierten Sonden einen reduzierten Hintergrund und eine erhöhte normalisierte Fluoreszenz (repräsentative Daten in Abbildung 1A und B). Besonders hervorzuheben ist, dass die Ultimate Precision Probes nach der Normalisierung eine höhere Endpunktfluoreszenz aufweisen und oft früher Ct-Werte erzielen, was die Genauigkeit und Robustheit des qPCR-Assays erhöht.

Noch beeindruckender ist, dass Ultimate Precision Probes mit internem BHQ1 und BHQ2 eine so hohe Quenching-Effizienz besitzen, dass ihre Leistung mit der ihrer doppelt gequenchten Gegenstücke vergleichbar ist. Im Vergleich zu dual-gequenchten Sonden reduzieren die Ultimate Precision Probes jedoch die Komplexität der Herstellung und Analyse sowie die damit verbundenen zusätzlichen Kosten.

Alle unsere Ultimate Precision Probes werden mit unserer neu entwickelten IP-RP HPLC-Methode und optimierten Lösungsmittelsystemen gereinigt. Dies trägt ebenfalls zu einem reduzierten Hintergrundsignal bei, da die Basistrennung des Ziel-Oligonukleotids von seinen Nebenprodukten die Reinigungseffizienz signifikant erhöht.



 

 

 

Abbildung 1. Verbesserte Quenching-Effizienz mit Ultimate Precision Probes mit einem einzelnen internen Quencher: Amplifikationskurven der qPCR-Ergebnisse aus Verdünnungsstufe 6 (104) des Primerkonzentrations-Assays für die Zielregion N in unserem SARS-CoV-2-Modellsystem. Alle Sonden wurden mit dem 5'-FAM-Fluorophor und BHQ1 unter Verwendung unterschiedlicher Sondenlayouts markiert. (A) Amplifikationsdiagramm ohne Hintergrundkorrektur (Rohdaten), (B) Amplifikationsdiagramm mit Hintergrundkorrektur (normalisierte Daten). Primerkonzentration (760 nmol/L); blaue Linie ist Standardsonde mit 3'-Quencher; rote Linie ist doppelt gequenchte Sonde; grüne Linie ist Ultimate Precision Probe und schwarze Linie ist doppelt gequenchte Wettbewerber-Sonde (Mittelwert von drei Experimenten). Alle Reaktionen wurden auf einem Roche LightCycler 480 unter Verwendung der LightCycler 480-Datenanalyse-Software (Roche, 2008) durchgeführt.

 

Für weitere Informationen zu den neuen Ultimate Precision Probes lesen Sie bitte die entsprechende Application Note.

 

 

 

Literature

 

Application Note

 

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